DNA怎么裂解？裂解的試劑主要有哪些？
裂解方法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解。化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法，通常會很少使DNA斷裂。這幾種方法是提取純化DNA中常用的方法。機械裂解可以更均一的裂解細胞，同化學裂解相比，機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞，但也會造成DNA的斷裂.一、機械裂解法主要有以下兩種：
1.熱休克(Thermalshock)，既反復凍溶法，是一種常用的機械裂解方式比，通常由冷凍和解凍兩部分組成(freezingandthawing)，。原理：由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。冷凍通常在液氮或-20℃冰上進行，解凍可以在37、50、65或100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和，但是很有效，有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。
2.超聲波處理(Ultrasonication)既利用超聲加熱的方法，把細胞破碎。但這種處理會導致DNA的斷裂，所以加熱不宜過劇烈，要設定好超聲時間和間隙時間，一般超聲時間不超過5秒，間隙時間最好大于超聲時間，這些都有利于保護酶的活性。bead-beating也是常用的機械處理方式，有報道指出bead-beating比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好雖然DNA產量較高，但通常得到的DNA片段較小。
。二、化學裂解和酶裂解法(在提核酸時聯合使用)主要是裂解液處理法，細胞裂解液的主要目的有以下幾種：（1）利用去污劑破壞脂質雙分子層，破裂細胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白變性使其穩定；（4）抑制蛋白酶活性。細胞裂解中常用的試劑有：50mMTris-HClpH7.4(緩沖體系)，150mMNaCl(等滲體系)，1mMPMSF(強大的蛋白酶抑制劑)，1mMEDTA(變性劑和穩定劑)，5μg/mlAprotinin(蛋白酶抑制劑)，5μg/mlLeupeptin(蛋白酶抑制劑)，1%Tritonx-100(破壞細胞)，1%Sodiumdeoxycholate(中度變性劑和蛋白溶解劑)，0.1%SDS(強變性劑和蛋白溶解劑)。7M尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解)，蛋白酶K等.也可以直接在我司購買ScienCell實驗室DNA、RNA、原代細胞裂解物等，無需進行繁瑣的細胞培養和裂解，到手就可以上實驗，做這方面實驗的您，會心動嗎？
1.熱休克(Thermalshock)，既反復凍溶法，是一種常用的機械裂解方式比，通常由冷凍和解凍兩部分組成(freezingandthawing)，。原理：由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。冷凍通常在液氮或-20℃冰上進行，解凍可以在37、50、65或100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和，但是很有效，有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。
2.超聲波處理(Ultrasonication)既利用超聲加熱的方法，把細胞破碎。但這種處理會導致DNA的斷裂，所以加熱不宜過劇烈，要設定好超聲時間和間隙時間，一般超聲時間不超過5秒，間隙時間最好大于超聲時間，這些都有利于保護酶的活性。bead-beating也是常用的機械處理方式，有報道指出bead-beating比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好雖然DNA產量較高，但通常得到的DNA片段較小。
。二、化學裂解和酶裂解法(在提核酸時聯合使用)主要是裂解液處理法，細胞裂解液的主要目的有以下幾種：（1）利用去污劑破壞脂質雙分子層，破裂細胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白變性使其穩定；（4）抑制蛋白酶活性。細胞裂解中常用的試劑有：50mMTris-HClpH7.4(緩沖體系)，150mMNaCl(等滲體系)，1mMPMSF(強大的蛋白酶抑制劑)，1mMEDTA(變性劑和穩定劑)，5μg/mlAprotinin(蛋白酶抑制劑)，5μg/mlLeupeptin(蛋白酶抑制劑)，1%Tritonx-100(破壞細胞)，1%Sodiumdeoxycholate(中度變性劑和蛋白溶解劑)，0.1%SDS(強變性劑和蛋白溶解劑)。7M尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解)，蛋白酶K等.也可以直接在我司購買ScienCell實驗室DNA、RNA、原代細胞裂解物等，無需進行繁瑣的細胞培養和裂解，到手就可以上實驗，做這方面實驗的您，會心動嗎？
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