細胞增殖檢測的技術與應用
一、背景
細胞增殖檢測是判定細胞活力的重要指標，有多種顯示方法，除實驗的細胞計數法之外，還可以進行細胞分裂指數的測定。細胞分裂是細胞增殖的方式，能比較確切地反映細胞增殖度。細胞增殖是指細胞在周期調控因子的作用下通過DNA復制、RNA轉錄和蛋白質合成等復雜反應而進行分裂的一系列過程。細胞增殖檢測技術廣泛應用于分子生物學、遺傳學、腫瘤生物學、免疫學、藥理和藥代動力學等研究領域。
二、檢測細胞增殖的技術主要包括：
1、滲透實驗。這種方法用來染細胞膜破損的細胞，活細胞不會被臺盼藍染成藍色。然后通過細胞計數器手動計數細胞數目。此方法快速、便宜、僅僅需要一少部分細胞。細胞傳代、凍存、或其它實驗可以用這種方法?；蛘咭部梢酝ㄟ^流式細胞儀來計數細胞數目。檢測前可以染PI排除死細胞。
2、直接增殖測定。這種方法利用DNA整合來測定細胞增殖。此方法利用整合到DNA中的放射性或非放射性的核酸類似物來檢測。比如：Brdu免疫化學染色法需要將細胞或組織標本經過變性處理，這就影響了標本的結構,使標本不適合下游實驗，也使得染色結果及程度過分地依賴于不同實驗所應用的不同條件。
3、細胞代謝法。這種方法是將四唑鹽加入細胞培養基內，這些四唑鹽可以被活細胞轉化為有顏色的甲瓚，用酶聯免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數量。此方法已廣泛用于各種細胞增殖的檢測,生物活性因子的活性檢測，大規模的抗腫瘤藥物篩選，細胞毒性試驗等。
三、應用
用于細胞膜熒光染料用于定量檢測體內外細胞增殖和肝脂肪酶在腫瘤細胞耐藥中的作用研究：
在同一群腫瘤細胞中定量測定了各亞群細胞分裂次數，同時保持細胞完整性，可繼續進行細胞功能的測定，也可提取細胞蛋白和RNA進行測定。
有研究指出APOBEC3G,、CD133、LIPC和S100P在功能上調節大腸癌的肝轉移，其陽性預示著大腸癌存在肝轉移。另一項研究顯示非小細胞肺癌中LIPC表達水平可能具有一個獨立的預后價值。
因此,本實驗利用這種新的DiO染色方法研究了LIPC在腫瘤細胞耐藥中的機制。主要方法及結果1DiO的研究1.1DiO和DiD同屬親脂性羰花青染料。它們是由兩個對稱的環，每個環連接一個長的碳氫鏈，環中間由奇數個次甲基連接構成。雙環結構及連接雙環的次甲基數目的不同決定了熒光分子的特性。
碳氫鏈的長短決定了它們與膜脂質雙層結構的親疏性。DiO的最大吸收和釋放波長分別是484nm和501nnm,DiD的最大吸收和釋放波長分別是644nm和665nm。1.2MTT測定DiO染色后細胞的增值情況。
結果顯示DiO染色后Lovo、SW480、SW620、CT26、HepG2細胞在1、2、3天不影響其增殖P>0.05。
細胞增殖檢測是判定細胞活力的重要指標，有多種顯示方法，除實驗的細胞計數法之外，還可以進行細胞分裂指數的測定。細胞分裂是細胞增殖的方式，能比較確切地反映細胞增殖度。細胞增殖是指細胞在周期調控因子的作用下通過DNA復制、RNA轉錄和蛋白質合成等復雜反應而進行分裂的一系列過程。細胞增殖檢測技術廣泛應用于分子生物學、遺傳學、腫瘤生物學、免疫學、藥理和藥代動力學等研究領域。
二、檢測細胞增殖的技術主要包括：
1、滲透實驗。這種方法用來染細胞膜破損的細胞，活細胞不會被臺盼藍染成藍色。然后通過細胞計數器手動計數細胞數目。此方法快速、便宜、僅僅需要一少部分細胞。細胞傳代、凍存、或其它實驗可以用這種方法?；蛘咭部梢酝ㄟ^流式細胞儀來計數細胞數目。檢測前可以染PI排除死細胞。
2、直接增殖測定。這種方法利用DNA整合來測定細胞增殖。此方法利用整合到DNA中的放射性或非放射性的核酸類似物來檢測。比如：Brdu免疫化學染色法需要將細胞或組織標本經過變性處理，這就影響了標本的結構,使標本不適合下游實驗，也使得染色結果及程度過分地依賴于不同實驗所應用的不同條件。
3、細胞代謝法。這種方法是將四唑鹽加入細胞培養基內，這些四唑鹽可以被活細胞轉化為有顏色的甲瓚，用酶聯免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數量。此方法已廣泛用于各種細胞增殖的檢測,生物活性因子的活性檢測，大規模的抗腫瘤藥物篩選，細胞毒性試驗等。
三、應用
用于細胞膜熒光染料用于定量檢測體內外細胞增殖和肝脂肪酶在腫瘤細胞耐藥中的作用研究：
在同一群腫瘤細胞中定量測定了各亞群細胞分裂次數，同時保持細胞完整性，可繼續進行細胞功能的測定，也可提取細胞蛋白和RNA進行測定。
有研究指出APOBEC3G,、CD133、LIPC和S100P在功能上調節大腸癌的肝轉移，其陽性預示著大腸癌存在肝轉移。另一項研究顯示非小細胞肺癌中LIPC表達水平可能具有一個獨立的預后價值。
因此,本實驗利用這種新的DiO染色方法研究了LIPC在腫瘤細胞耐藥中的機制。主要方法及結果1DiO的研究1.1DiO和DiD同屬親脂性羰花青染料。它們是由兩個對稱的環，每個環連接一個長的碳氫鏈，環中間由奇數個次甲基連接構成。雙環結構及連接雙環的次甲基數目的不同決定了熒光分子的特性。
碳氫鏈的長短決定了它們與膜脂質雙層結構的親疏性。DiO的最大吸收和釋放波長分別是484nm和501nnm,DiD的最大吸收和釋放波長分別是644nm和665nm。1.2MTT測定DiO染色后細胞的增值情況。
結果顯示DiO染色后Lovo、SW480、SW620、CT26、HepG2細胞在1、2、3天不影響其增殖P>0.05。
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