免疫共沉淀（Co-IP）
2020/11/5 15:19:39
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詳細介紹
一、免疫共沉淀（Co-IP）概述
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗體的特異性結合以及細菌的ProteinA或G特異性地結合到免疫球蛋白的Fc片段的原理開發出來的方法。其基本原理是，為了研究細胞中蛋白A與蛋白B是否結合，在細胞裂解液中加入抗蛋白A的抗體，孵育后再加入與抗體特異結合的結合于Agarose珠上的ProteinA或G，若細胞中有與蛋白A結合的蛋白B，就可以形成這樣一種復合物：“蛋白B—蛋白A—抗蛋白A抗體—agaroseProteinA或G”，經變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復合物又被分開。蛋白B然后經western blot或質譜檢測目的蛋白。蛋白A這種方法得到的蛋白B是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。
二、技術流程
1、收集經過處理的細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30 min, 細胞裂解液于4°C，12000轉離心30 min后取上清；
2、取少量裂解液以備免疫印跡分析，剩余裂解液中加入適量的相應抗體，4 °C緩慢搖晃孵育過夜；
3、取10μL protein A 或GAgarose珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3000 rpm離心3 min；
4、將預處理過的10 μl protein A 或G瓊脂糖珠加入到經過與抗體孵育的細胞裂解液中，4 °C緩慢搖晃孵育2~4h，使抗體與protein A或GAgarose珠偶聯；
5、免疫沉淀反應后，在4 °C以3000 rpm 速度離心3min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1mL裂解緩沖液洗3－4次；最后加入15 μL的3×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；
6、SDS-PAGE, 免疫印跡或質譜儀分析。
三、樣品要求
1、顧客提供：蛋白質樣品（組織、細胞、蛋白質溶液等）、用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相關信息；
2、需要通過轉染載體表達基因的，提供表達載體，或由本公司構建載體；
3、其他免疫共沉淀相關信息。
運輸要求：干冰包裝寄送
四、報告內容及標準
1、免疫共沉淀電子圖片及分析結果；
2、相互作用蛋白鑒定結果，質譜鑒定結果和（或）western blot鑒定結果；
3、完整的實驗步驟、軟件檢索等參數
根據甲方要求而制定具體的內容，詳細請依所簽約合同的內容為準。
五、收費標準及服務周期
收費標準及服務周期因根據客戶提供的樣品不同而有所改變，詳細請跟客服專員聯系或參考所簽署的合作合同。
六、質量保證
提供客觀、公正的免疫共沉淀實驗結果
七、售后服務
本公司會不定期進行顧客回訪，以提高我們的服務質量。本條款以所簽訂的合作合同為依歸，詳情會因合同內容的不同而有所差異。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗體的特異性結合以及細菌的ProteinA或G特異性地結合到免疫球蛋白的Fc片段的原理開發出來的方法。其基本原理是，為了研究細胞中蛋白A與蛋白B是否結合，在細胞裂解液中加入抗蛋白A的抗體，孵育后再加入與抗體特異結合的結合于Agarose珠上的ProteinA或G，若細胞中有與蛋白A結合的蛋白B，就可以形成這樣一種復合物：“蛋白B—蛋白A—抗蛋白A抗體—agaroseProteinA或G”，經變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復合物又被分開。蛋白B然后經western blot或質譜檢測目的蛋白。蛋白A這種方法得到的蛋白B是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。
二、技術流程
1、收集經過處理的細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30 min, 細胞裂解液于4°C，12000轉離心30 min后取上清；
2、取少量裂解液以備免疫印跡分析，剩余裂解液中加入適量的相應抗體，4 °C緩慢搖晃孵育過夜；
3、取10μL protein A 或GAgarose珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3000 rpm離心3 min；
4、將預處理過的10 μl protein A 或G瓊脂糖珠加入到經過與抗體孵育的細胞裂解液中，4 °C緩慢搖晃孵育2~4h，使抗體與protein A或GAgarose珠偶聯；
5、免疫沉淀反應后，在4 °C以3000 rpm 速度離心3min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1mL裂解緩沖液洗3－4次；最后加入15 μL的3×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；
6、SDS-PAGE, 免疫印跡或質譜儀分析。
三、樣品要求
1、顧客提供：蛋白質樣品（組織、細胞、蛋白質溶液等）、用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相關信息；
2、需要通過轉染載體表達基因的，提供表達載體，或由本公司構建載體；
3、其他免疫共沉淀相關信息。
運輸要求：干冰包裝寄送
四、報告內容及標準
1、免疫共沉淀電子圖片及分析結果；
2、相互作用蛋白鑒定結果，質譜鑒定結果和（或）western blot鑒定結果；
3、完整的實驗步驟、軟件檢索等參數
根據甲方要求而制定具體的內容，詳細請依所簽約合同的內容為準。
五、收費標準及服務周期
收費標準及服務周期因根據客戶提供的樣品不同而有所改變，詳細請跟客服專員聯系或參考所簽署的合作合同。
六、質量保證
提供客觀、公正的免疫共沉淀實驗結果
七、售后服務
本公司會不定期進行顧客回訪，以提高我們的服務質量。本條款以所簽訂的合作合同為依歸，詳情會因合同內容的不同而有所差異。
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